新型酪氨酸激酶抑制剂B-1对U251胶质瘤细胞存活和凋亡的影响

摘要：目的探讨GNF-5837修饰改造而合成的神经生长因子受体酪氨酸激酶A（Trk A）抑制剂B-1对胶质瘤U251细胞存活和凋亡的影响,为恶性胶质瘤治疗提供新的思路。方法 B-1和GNF-5837 1.0×10-11-1.0×103mol·L（-1）分别与Trk A激酶作用1 h,ADP-Glo？激酶检测法测定Trk A活性;MTT法检测胶质瘤U251细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）存活率;直接计数法检测胶质瘤U251细胞集落形成;流式细胞仪检测胶质瘤U251细胞凋亡率;Western蛋白印迹法检测BAD、BCL-2和胱天蛋白酶原3蛋白表达水平。结果B-1和GNF-5837对Trk A活性的抑制作用相近,IC_（50）值分别为4.7±1.0和（4.3±1.7）nmol·L（-1）;B-1可浓度依赖性抑制胶质瘤U251细胞的存活（r=0.968,P〈0.01）,14μmol·L（-1）时存活率降到50%;且B-1对HUVEC的IC_（50）约为31μmol·L（-1）,高于GNF-5837的IC_（50）13μmol·L（-1）;B-1浓度依赖性抑制U251细胞集落形成能力（r=0.959,P〈0.05）;与细胞对照组相比,B-1 1040μmol·L（-1）作用72 h后U251细胞的凋亡率升高（P〈0.01）;U251细胞内促凋亡蛋白BAD水平显著上升（P〈0.01）,而抗凋亡蛋白BCL-2和胱天蛋白酶原3表达水平降低（P〈0.01）。结论 B-1能抑制胶质瘤U251细胞存活,其机制与B-1通过抑制Trk活性及下游信号通路,降低抗凋亡蛋白水平的同时增加促凋亡蛋白水平,最终诱导其凋亡有关。