细胞色素P450CYP3A65斑马鱼模型建立及对环境污染物的生物响应

摘要：目的：建立细胞色素P450CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼用于快速、直观检测重金属（铜、镉、锌）及类二噁英化合物五氯联苯（ PCB126）等环境污染物。方法 PCR方法钓取斑马鱼CYP3A65基因调控序列，构建于pT2AL200R150G转座载体克隆位点，将pTol2-CYP3A65-EGFP 质粒与pCS-TP 转座酶mRNA共同注射入斑马鱼胚胎单细胞，通过荧光筛选，遗传选育和建立荧光标记转基因斑马鱼品系 Tg （ CYP3A65-EGFP）；利用该转基因斑马鱼胚胎及幼鱼检测上述3种重金属及 PCB126的生物学响应。结果成功建立了CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼品系，绿色荧光在肝和消化道表达；该转基因斑马鱼对3种重金属及PCB126产生生物学响应。染毒96 h后，铜0.1和0.2μmol·L^－1、镉0.35和0.7μmol·L^－1组、锌1.5和3μmol·L^－1组、PCB126所有浓度组荧光相对表达量显著增强（ P＜0.01）；铜0.9μmol·L^－1组、镉2.7和5.4μmol·L^－1组及锌24μmol·L^－1组荧光相对表达量显著减弱（ P＜0.01）；染毒168 h 后，铜0.1和0.2μmol·L^－1组、镉0.35和0.7μmol·L^－1组、锌1.5和3μmol·L^－1组及PCB1262～32μmol·L^－1浓度组荧光相对表达量显著增强（ P＜0.01），铜0.9μmol·L^－1组、镉2.7和5.4μmol·L^－1组、锌12和24μmol·L^－1组荧光相对表达量减弱（ P＜0.05），随着浓度增加荧光减弱，呈现出量效关系。结论 CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼模型可以用来检测铜、镉、锌及PCB126等环境污染物。