吴茱萸碱对人结肠癌细胞周期阻滞及凋亡的影响

摘要：目的：探讨吴茱萸碱对人结肠癌细胞周期阻滞及凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人结肠癌HCT-116细胞分别加入吴茱萸碱1.5,3.0,6.0和12μmol·L^－1继续培养24,48和72 h,CCK-8法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞存活的影响；用流式细胞术检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡和细胞周期的影响；倒置显微镜镜下观察细胞形态变化；荧光显微镜观察 Hoechst 染色后细胞凋亡的形态学改变；Western蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白A1的表达及凋亡相关蛋白P53, Bax ,Bcl-2,激活型胱天蛋白酶3的表达。结果吴茱萸碱1.5,3.0和6.0μmol·L^－1作用24,48和72 h后,HCT-116细胞增殖受到抑制（ P＜0.05）,且呈时间（ r时间＝0.744, P＜0.05）和浓度（ r浓度＝0.953, P＜0.01）依赖性。吴茱萸碱作用HCT-116细胞48 h后, S期细胞由正常对照组的（13.9±7.0）％增加至（39.7±11.7）％（P＜0.05）；细胞凋亡率由正常对照组的（4.2±3.0）％增加至（14.9±5.8）％（P＜0.05）。光学显微镜下可见,随着药物浓度的增加,细胞的形态发生改变,胞膜破裂,产生细胞碎片,并出现大量漂浮细胞；Hoechst染色可见部分细胞出现细胞核固缩、核发白、染色质凝集等凋亡变化；P53、Bax和激活型胱天蛋白酶3蛋白表达增加, Bcl-2、细胞周期蛋白A1蛋白表达下降。结论吴茱萸碱能够通过下调细胞周期蛋白 A1的表达；激活 P53信号通路,下调Bcl-2、上调Bax,破坏Bcl-2/Bax的比例；激活胱天蛋白酶3,共同促进人结肠癌HCT-116细胞的凋亡。