灵芝多糖对斑马鱼存活、发育和衰老的影响

摘要：目的：观察灵芝多糖对斑马鱼存活、发育和衰老的影响。方法取正常受精的斑马鱼卵，在其单细胞发育期注射二胺吗啉代寡核苷酸（mO），制备 p53基因敲除斑马鱼模型。正常斑马鱼卵和 p53基因敲除斑马鱼卵孵育8 h 后，分别加入灵芝多糖1，2和3 g·L-1于28℃继续培养3 d，测定斑马鱼存活率和畸形率，并用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gaI）染色法分析斑马鱼细胞 SA-β-gaI 染色阳性率，用逆转录 PCR 检测衰老相关基因端粒酶逆转录酶基因（ TERT）、抑癌基因 p53、小鼠双微体基因（ mdm2）和 p21基因表达。结果灵芝多糖1和2 g·L-1培养3 d 对野生型斑马鱼的发育无明显影响，3 g·L-1时大部分野生型斑马鱼胚胎细胞表现为畸形，并且存活率仅为48.6%；灵芝多糖1~3 g·L-1对 p53基因敲除斑马鱼的存活和发育无明显影响。灵芝多糖2 g·L-1处理3 d，野生型斑马鱼 SA-β-gaI 染色阳性率与对照组相比明显降低（ P﹤0.01），p53基因敲除斑马鱼 SA-β-gaI 染色阳性率无明显变化。逆转录 PCR 结果表明，灵芝多糖2 g·L-1可降低野生型斑马鱼细胞 p21和 p53基因表达（P﹤0.05，P﹤0.01），对 TERT和 mdm2基因表达无明显影响；对 p53基因敲除斑马鱼 TERT，mdm2，p21和 p53基因表达均无明显影响。结论灵芝多糖2 g·L-1对野生型斑马鱼胚胎细胞复制性衰老具有改善作用，≥3 g·L-1时可导致野生型斑马鱼幼胚发育畸形和死亡。灵芝多糖对斑马鱼衰老的改善作用可能与其降低 p21和 p53基因表达有关。