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1 《中国药理学与毒理学杂志》为军事医学科学院毒物药物研究所、中国药 理学会和中国毒理学会共同主办的学术性刊物,双月刊,国内外公开发行。编辑部设在军事医学科学院毒物药物研究所。本刊是中国中文核心期刊
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过氧化氢诱导血管平滑肌细胞内质网应激及其自噬作用
作者: 李松岩 [1] ; 郭敏 [2] ; 王烟 [1] ; 于洋 [1] ; 刘师兵 [1] ; 徐冶 [1]
关键词: 自噬 血管平滑肌细胞 过氧化氢 内质网应激
摘要:目的观察过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激及其自噬的作用机制。方法体外培养VSMC细胞,加入H2O250,100,200,400,600,800,1200和1600μmol·L-1分别作用12和24 h后,MTT法检测H2O2对VSMC的抑制率;倒置相差显微镜观察H2O2对VSMC细胞形态的影响;采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和泛素结合蛋白p62的表达,采用Western蛋白印迹法检测自噬相关蛋白人卷曲螺旋肌球蛋白样BCL2相互作用蛋白/自噬基因(Beclin-1)和LC3、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及自噬上游信号通路哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(m TOR)的表达。结果 MTT结果显示,H2O2501600μmol·L-1作用VSMC细胞12和24 h,VSMC细胞存活率明显降低,12和24 h的IC50分别为(597.2±2.3)和(447.4±1.7)μmol·L-1。倒置相差显微镜观察可见H2O2400μmol·L-1组VSMC收缩变圆。H2O2400μmol·L-1作用VSMC 12 h时,细胞存活率由(97.5±0.1)%下降至(74.4±1.0)%;作用VSMC 24 h,下降至(56.8±0.9)%(P〈0.01)。激光共聚焦显微镜检测发现,H2O2400μmol·L-1作用VSMC 8 h,细胞浆中LC3和p62蛋白随H2O2作用时间的延长表达增加。LC3与p62的共定位显示,H2O2400μmol·L-1作用8 h最明显。Western蛋白印迹结果表明,H2O2诱导内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP和自噬相关蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著增加(P〈0.01),m TOR的表达显著降低(P〈0.01)。结论 H2O2可能通过诱导VSMC内质网应激激活自噬。
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