全氟异丁烯染毒对大鼠肺微血管内皮细胞的影响

摘要：目的观察体外培养的肺微血管内皮细胞（PMVEC）经全氟异丁烯（PFIB）染毒后其肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9的含量变化。方法采用改进的组织块种植法分离培养大鼠PMVEC,细胞经鉴定后分为正常对照组和5个PFIB染毒组（n=3）。正常对照组为静息状态细胞;染毒组行PFIB暴露（浓度200 mg·m^-3,持续5 min）染毒后0.5,1,2,4和8 h分别收集培养上清液和细胞裂解液。ELISA检测TNF-α,IL-1β,ICAM-1,MMP-2和MMP-9含量,明胶酶谱法分析MMP-2和MMP-9酶活性。结果 ①依据细胞生长的形态特征、特异性抗原的表达和植物凝集素结合实验鉴定,采用肺组织块原代培养法获得的细胞均符合PMVEC的特征。②与正常对照组比较,PMVEC经PFIB染毒后2 h细胞裂解液中TNF-α含量显著升高（P〈0.05）,4和8 h明显回落。细胞培养上清液中TNF-α含量变化趋势与细胞裂解液中TNF-α变化趋势类似,仅发生时间稍滞后。③PFIB染毒后PMVEC激活并合成IL-1β的时间稍滞后于TNF-α,但达峰与持续时间与TNF-α相似。④PFIB染毒后PMVEC培养上清液中ICAM-1含量持续保持于较低水平。⑤PFIB染毒组细胞裂解液中未检测到MMP-2活性,培养上清液中检测到较高水平的MMP-2含量与活性。PFIB染毒组的培养上清液和细胞裂解液中均未检测到MMP-9表达与活性。结论 PFIB染毒刺激存活的PMVEC合成并释放大量TNF-α,IL-1β,MMP-2和结合型ICAM-1。