棒曲霉素对人肝细胞L-02的毒性效应及作用机制

摘要：目的研究棒曲霉素（PAT）对人肝细胞L-02的毒性作用,并探讨其作用的分子机制。方法 PAT1.25,2.5,5,10和20μmol·L（-1）分别作用于L-02细胞24和48 h,采用噻唑蓝（MTT）法检测PAT对L-02细胞增殖的抑制作用;PAT 0,5和10μmol·L（-1）作用L-02细胞24 h后,Hoechst33258和JC-1染色,通过荧光显微镜进行细胞形态及线粒体膜电位（MMP）观察;利用流式细胞术对细胞凋亡、MMP及细胞内活性氧（ROS）水平进行定量分析;Western蛋白印迹法检测PAT对线粒体凋亡通路的影响。结果 PAT明显抑制L-02细胞的生长,24和48 h的IC50值分别为6.61和2.78μmol·L（-1）;与正常对照组低MMP比率（9.2±2.3）%相比,PAT 5和10μmol·L（-1）组低MMP比率显著升高（P〈0.01）,分别升高至（23.4±4.5）%和（47.1±5.5）%;PAT 5和10μmol·L（-1）处理后L-02细胞早期凋亡率较正常对照组（3.8±1.1）%升高（P〈0.01）,分别增至（29.8±4.5）%和（24.1±6.2）%;PAT引起L-02细胞内ROS增加,使用外源性谷胱甘肽预孵育细胞后,阻断了PAT诱导的ROS升高和增殖抑制的作用。结论 PAT可显著影响L-02的生长,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡,其机制与胞内ROS水平升高有关。