甘露醇诱导人肾小管上皮细胞的氧化应激作用

摘要：目的观察甘露醇是否通过引起人肾小管上皮细胞（HK-2）的氧化应激反应而损伤细胞。方法MTT法检测不同浓度甘露醇（50,100,150,200,250,300,350和400 mmol·L^-1）处理HK-2细胞4,10,24,48和72 h对细胞活性的影响;甘露醇100和250 mmol·L^-1作用细胞4~72 h,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧（ROS）水平,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒分别检测MDA含量、SOD活性和GSH含量。结果甘露醇250 mmol·L^-1作用72 h,细胞增殖活性约为溶剂对照组的50%（P〈0.05）;孵育4 h,细胞ROS的荧光强度（68.7±3.6）显著高于溶剂对照组（50.3±4.6）（P〈0.05）;孵育4~72 h,细胞形态出现细胞肿胀、空泡化,细胞脱落;细胞内MDA含量明显增高（P〈0.05）,SOD活性和GSH含量明显下降（P〈0.05）。孵育4 h时,溶剂对照组和甘露醇250 mmol·L^-1处理组细胞内MDA含量分别为（3.1±1.6）和（20.9±5.7）μmol·g-1蛋白,SOD活性分别为（71.8±6.5）和（47.3±8.8）k U·g^-1蛋白,GSH含量分别为（60.8±2.3）和（13.6±3.3）μmol·g^-1蛋白。甘露醇100 mmol·L^-1处理组GSH含量显著降低（P〈0.05）,其余各项指标变化不明显。结论高浓度（250 mmol·L^-1）甘露醇可能通过氧化应激途径损伤肾小管上皮细胞而产生细胞毒性作用。