亚硫酸氢钠穿心莲内酯对人肾小管上皮HK-2细胞的毒性作用（英文）

摘要：目的探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯（ASB）对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用。方法HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后,在经ASB作用2 h前,分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）10 mmol·L-1、2-氨基-4（丁基磺酸亚氨）-丁酸（BSO）2 mmol·L-1及30 min前分别加入过氧化氢酶（CAT）1000 U·L-1、环孢素A（Cs A）50μmol·L-1,再经ASB作用24 h,MTT法检测细胞存活率;用酶标仪检测乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、总ATP酶（T-ATP）活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位（MMP）和活性氧（ROS）;Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和细胞色素c（Cyt c）蛋白的表达。结果 ASB呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞增殖,作用24和48 h后IC50值分别为19.1±3.6和（11.6±3.9）g·L-1。ASB 20 g·L-1处理HK-2细胞24 h后,G2/M期细胞由对照组的（23.3±1.0）%增至（37.0±0.8）%（P〈0.01）。与正常对照组相比,ASB组LDH漏出率和ROS水平明显增加,MMP呈下降趋势;与ASB 20 g·L-1组相比,加入还原剂NAC后,细胞存活率和MMP水平明显增加（P〈0.05）,LDH和ROS水平明显降低（P〈0.05）;加入Cs A后,细胞存活率显著降低（P〈0.01）,LDH和细胞内ROS水平明显增加（P〈0.05）。随着ASB浓度增加,HK-2细胞上清液中的MDA水平明显增加,GSH,SOD和T-ATP酶活性逐渐减弱;同时细胞内胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表达升高。结论 ASB对HK-2细胞的毒性作用可能是通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢,改变细胞内氧化还原状态,耗竭细胞内GSH和SOD,导致细胞内ROS大量堆积,引发脂质过氧化作用,破坏细胞膜的通透性,导致Cyt c等凋亡因子从线粒体释放,进而引发细胞凋亡或坏死。