苦参碱体外对人髓母细胞瘤D341细胞增殖、凋亡和自噬的作用

摘要：目的探讨苦参碱在体外诱导人髓母细胞瘤D341细胞增殖、凋亡和自噬的作用。方法体外培养细胞,随机分为对照组、苦参碱0.5,1.0,1.5和2.0 g·L-1组,作用时间为24,48和72 h。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞结构,Western蛋白质印迹法检测细胞Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）和Bcl-2同源结构域蛋白抗体beclin1蛋白表达。随后在苦参碱作用前1 h加入终浓度为5 mmol·L-1的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）,观察细胞beclin1和LC3蛋白表达的变化。结果苦参碱0.5~2.0 g·L-1能明显抑制D341细胞增殖,具有浓度效应关系（r24 h=0.994,r48 h=0.992,r72 h=0.996,P〈0.01）,而且可诱导D341细胞凋亡（r24 h=0.937,r48 h=0.947,r72 h=0.987,P〈0.01）;苦参碱浓度为2.0 g·L-1时,对D341细胞增殖的抑制作用（r=0.999,P〈0.01）和凋亡的诱导作用（r=0.990,P〈0.01）具有时间效应关系。透射电镜观察发现,苦参碱2.0 g·L-1作用24 h,D341细胞出现气穴样的空泡结构,细胞染色质浓缩、边缘化;作用48 h,细胞核染色质浓缩明显,细胞胞浆中可见空泡;作用72 h,细胞核固缩明显,部分细胞可见核裂解,空泡明显增大。Western蛋白质印迹法实验结果表明,苦参碱0.5~2.0 g·L-1增强D341细胞Bax蛋白表达（r24 h=0.981,r48 h=0.967,r72 h=0.998,P〈0.01）,抑制Bcl-2蛋白表达（r24 h=-0.977,r48 h=-0.989,r72 h=-0.968,P〈0.01）。苦参碱作用48 h可增强D341细胞胱天蛋白酶3的表达（r48 h=0.995,P〈0.01）,作用24,48和72 h能增强D341细胞beclin1蛋白的表达,具有浓度效应关系（r24 h=0.989,r48 h=0.986,r72 h=0.966,P〈0.01）,自噬抑制剂3-MA可抑制此作用（P〈0.05）。苦参碱能使D341细胞LC3-Ⅰ蛋白表达减少,LC3-Ⅱ表达增加,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低（r24 h=-0.795,r48 h=-0.886,r72 h=-0.901,P〈0.05）;自噬抑制剂3-MA可抑制苦参碱对LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响（P〈0