抑制JNK 磷酸化参与褪黑素对花萼海绵诱癌素引起的tau蛋白过度磷酸化的保护机制

摘要：目的：探讨花萼海绵诱癌素（ CA）在成神经瘤细胞（ N2a）引起tau蛋白过度磷酸化的机制,及褪黑素对其是否具有保护作用。方法小鼠成神经瘤细胞（ N2a）给予CA 5 nmol·L^－1处理,或同时给予褪黑素50 mol·L^－1,或同时给予维生素E（ Vit E）50 mol·L^－1处理12 h,用免疫印迹技术检测tau蛋白在Ser422位点的磷酸化水平,磷酸化c-jun氨基端激酶（ p-JNK）和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶（ p-MKK4）的含量,免疫荧光检测p-JNK含量和分布,荧光法测定细胞内丙二醛（ MDA）含量,32 P-特异底物标记技术检测p38丝裂原活化蛋白激酶（ p38MAPK）活性。结果 CA在N2a细胞引起tau蛋白Ser422位点磷酸化水平显著升高（1.70±0.19,1.0, P＜0.01）,褪黑素拮抗CA引起的 tau蛋白Ser422位点过度磷酸化（0.98±0.12,1.70±0.19, P＜0.01）；CA引起细胞内MDA含量升高（μmol·g^－1蛋白,0.241±0.006,0.141±0.006, P＜0.01）,褪黑素和Vit E 均可抑制 CA 引起的细胞内 MDA 含量升高（μmol·g^－1蛋白,0.172±0.004,0.193±0.005,0.241±0.006, P＜0.01）；CA 不改变 p38MAPK 活性和蛋白水平,但引起 p-JNK 含量升高（1.91±0.27,1, P＜0.01）和p-MKK4（1.81±0.09, P＜0.01）含量升高,褪黑素抑制CA引起的p-JNK含量升高（1.11±0.15,1.91±0.27,P＜0.01）和p-MKK4（1.14±0.06,1.81±0.09, P＜0.01）含量升高；JNK抑制剂SP600125可抑制CA诱导的tau蛋白过度磷酸化,MKK4磷酸化抑制剂地昔帕明可消除CA诱导的JNK磷酸化和tau蛋白过度磷酸化。结论褪黑素抑制JNK磷酸化参与其对CA诱导的tau蛋白Ser422位点过度磷酸化的预防作用。