多枝雾水葛木脂素类化合物体外抗炎作用及其机制

摘要：目的研究从多枝雾水葛中分离的新化合物雾水葛木脂素（pouzolignan）D，C和E（本文命名为化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ）的抗炎作用，初步探讨其抗炎机制。方法通过脂多糖（LPS）体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型，用Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮（NO）的含量，用酶联免疫分析法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）的含量，实时荧光定量RT—PCR法检测TNF—α、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及环氧合酶2（COX-2）mRNA表达。结果与溶剂对照组相比，化合物Ⅰ和Ⅱ20，40，80，160和320mg·L-1对细胞无明显毒性，化合物Ⅲ20，40，80和160mg·L-1对细胞存活率无明显抑制作用。化合物Ⅰ40，80和160mg·L-1组细胞释放NO含量随着化合物浓度的增加而降低（r=0．675，P〈0．05），化合物Ⅰ160mg·L-1组PGE。和TNF-α含量与模型组相比明显降低（P〈0．05）。化合物Ⅱ40，80和160mg·L-1组细胞释放PGE2量随着化合物浓度的增加而减少（r=0．992，P〈0．01），化合物Ⅱ80和160mg·L-1组TNF—α含量逐渐减少（r=0．995，P〈0．01），160mg·L-1同时也抑制了NO的释放（P〈0．05）。化合物Ⅲ20，40和80mg·L。明显降低炎症细胞释放的NO，无明显浓度效应关系（r=0．605，P〉0．05），同时40和80mg·L-1组PGE2和TNF—α的释放量也均明显减少，呈浓度依赖性（r=0．993，P〈0．01；r=0．984，P〈0．01）。实时荧光定量RT—PCR结果显示，化合物Ⅰ和Ⅱ明显降低COX-2和TNF—α mRNA表达（P〈0．05，P〈0．01），化合物Ⅱ和Ⅲ能明显降低iNOSmRNA表达（P〈0．05，P〈0．01）。结论化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ通过减少炎症细胞释放炎症因子NO，PGE，和TNF-α，同时不同程度地影响iNOS，COX-2和TNF-α基因表达而发挥抗炎作用。