高谷氨酸环境下肌肽对星形胶质细胞谷氨酸转运体-1表达及活性的正调节作用

摘要：目的探讨肌肽在高浓度谷氨酸作用下对星形胶质细胞谷氨酸转运体一1（GLT一1）和谷氨酸一天冬氨酸转运体（GLAST）的表达及活性的影响。方法胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度。谷氨酸10mm01．L。作用星形胶质细胞24，48和72h，MTT法和细胞核荧光双染法检测细胞存活率及细胞死亡模式。肌肽5mmol·L^-1预处理30min后，加入谷氨酸10mmol·L^-1作用24h，采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR分别检测GLT-1和GLAST蛋白及mRNA表达。采用实时荧光定量PCR检测肌肽5mmol·L^-1单独作用1—5d后，GLT-1mRNA和GLASTmRNA表达。肌肽5mmol·L^-1预处理30min再加谷氨酸10mmol·L^-1作用30min后，用高效液相色谱法检测胞外上清液谷氨酸含量。结果培养的星形胶质细胞纯度在95％以上。谷氨酸10mmol·L^-1攻击48h内不影响星形胶质细胞存活，而攻击72h星形胶质细胞存活率下降至82．0％，细胞凋亡率增加至24．7％。肌肽5mmol·L^-1预处理30min，则能显著上调高谷氨酸环境下星形胶质细胞GLT-1mRNA及蛋白的表达（P〈0．05），但不影响GLAST的表达。肌肽单独处理1—5d不影响GLT-1和GLASTmRNA的表达。肌肽预处理能显著提高星形胶质细胞对胞外谷氨酸的摄取能力。结论在高浓度谷氨酸条件下，肌肽能促进星形胶质细胞对胞外谷氨酸的快速摄取，同时上调GLT-1的表达，但不影响GLAST的表达。