丁氟螨酯对SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制

摘要：目的研究丁氟螨酯对人经神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制。方法加入丁氟螨酯0.03,0.06,0.125,0.25,0.5,1,2,2.6,4,6,8和16 mmol·L（-1）处理SH-SY5Y细胞48 h,MTT法测定细胞存活;DCFH-DA荧光探针标记法检测细胞内活性氧（ROS）水平;JC-1标记法检测细胞线粒体膜电位;Hoechst 33258染色观察细胞核形态;碘化丙啶（PI）染色和流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测磷酸化P38蛋白（p-P38）和磷酸化Jun激酶（p-JNK）表达水平。结果与溶剂（DMSO）对照组相比,共孵育48 h后,丁氟螨酯≥0.06 mmol·L（-1）时可降低细胞存活率（P〈0.05）,且随浓度增高细胞存活率有降低趋势,IC_（50）为2.6 mmol·L（-1）;丁氟螨酯1,2,4和6 mmol·L（-1）组细胞ROS水平升高（P〈0.01）,线粒体膜电位下降（P〈0.01）。Hoechst 33258染色结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L（-1）组SH-SY5Y细胞出现颗粒状荧光,细胞核固缩和崩解;流式细胞仪检测结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L（-1）组细胞凋亡率由DMSO对照组的（0.7±0.1）%分别上升至（6.7±0.1）%,（72.4±8.6）%和（90.7±3.2）%（P〈0.01）;丁氟螨酯4和6 mmol·L（-1）组G_1期细胞较DMSO对照组明显增加（P〈0.01）;Western蛋白印迹结果表明,丁氟螨酯4和6 mmol·L（-1）组p-JNK表达均升高（P〈0.01）,丁氟螨酯6 mmol·L（-1）组p-P38表达水平增加（P〈0.01）。结论丁氟螨酯可能通过氧化损伤、激活P38蛋白和JNK蛋白诱导SH-SY5Y细胞G_1期阻滞和凋亡。