微RNA-129表达对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其分子机制

摘要：目的分析微RNA-129（mi R-129）表达对食管鳞癌（ESCC）细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能的分子机制。方法构建mi R-129过表达载体（p GCMV/EGFP/mi R-129）和对照载体（p GCMV/EGFP/mi R-NC）,分别稳定转染ESCC细胞Eca109和EC9706,实时定量PCR检测mi R-129表达水平;MTT法、克隆形成实验和流式细胞术分别检测mi R-129表达对食管癌细胞体外增殖活性、细胞凋亡率和细胞周期的影响;构建含有Bcl-2基因3′-UTR野生和突变序列的荧光素酶报告基因载体,分别与p GCMV/EGFP/mi R-129共转染人ESCC细胞Eca109,双重荧光素酶报告基因实验分析荧光素酶活性变化;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、激活型胱天蛋白酶3及总胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果 mi R-129过表达可显著抑制食管癌细胞增殖（P〈0.01）,增加细胞凋亡率（P〈0.05）,并诱导细胞G0/G1期比例增加和S期比例降低（P〈0.05）,G2/M期比例则无显著变化。荧光素酶报告基因实验分析结果表明,mi R-129可显著降低含有Bcl-2基因3′-UTR野生序列的荧光素酶活性,而不降低含有Bcl-2基因3′-UTR突变序列的荧光素酶活性。Western蛋白质印迹法检测结果提示,mi R-129过表达可显著降低ESCC细胞中Bcl-2蛋白表达,增加激活型胱天蛋白酶3蛋白水平（P〈0.05）,总胱天蛋白酶3蛋白表达水平无明显变化。结论 mi R-129可能通过靶向调控Bcl-2表达而影响ESCC细胞增殖活性、凋亡和细胞周期的变化,为mi R-129成为ESCC临床治疗的分子靶标提供了实验依据。