地昔帕明逆转人脑胶质瘤耐药细胞U251／TR对替莫唑胺的耐药作用

摘要：目的探讨抗抑郁药地昔帕明（DMI）对人脑胶质瘤耐药细胞（U251/TR）对替莫唑胺（TMZ）耐药作用的影响及其机制。方法 DMI 20~80μmol·L^-1或TMZ 0.5~10 mmol·L^-1处理U251/TR细胞24 h,用CCK-8法测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量（IC50）。CCK-8检测TMZ（1和2 mmol·L^-1）和DMI（20,30和40μmol·L^-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h对细胞增殖抑制的影响,用金正均法计算Q值来评价两种药物的协同效应。TMZ（1 mmol·L^-1）和DMI（30μmol·L^-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h,以Hoechst33258染色观察细胞核形态,发光法检测胱天蛋白酶3活性;实时定量PCR和Western蛋白印迹法检测C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达;小干扰RNA（si RNA）沉默CHOP的表达后,观察TMZ（1 mmol·L^-1）和DMI（30μmol·L^-1）联合给药对U251/TR增殖抑制的影响。结果 DMI或TMZ单用对U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性（r2=0.983,0.982,P〈0.05）,IC50分别为（33.6±0.5）μmol·L^-1和（2.5±0.6）mmol·L^-1。TMZ（1和2 mmol·L^-1）和DMI（20,30和40μmol·L^-1）联合给药能24 h对U251/TR细胞的增殖抑制率明显强于单独给药,以金正均法计算联合给药的Q值均〉1.15,证实TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时,DMI 30μmol·L^-1和TMZ 1 mmol·L^-1联和应用可诱导U251/TR细胞凋亡,主要表现为细胞核固缩、染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给药的效果（P〈0.05）。DMI和TMZ联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白CHOP的表达（P〈0.05）。以si RNA沉默CHOP表达后,DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱,联合给药组细胞生存率由51.8%升至62.2%（P〈0.05）。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞U251/TR对TMZ的耐药性,其机制可能与激活CHOP表达有关。