蛇床子素延缓叔丁基过氧化氢诱导的神经干细胞衰老

摘要：目的通过建立神经干细胞（NSC）体外衰老模型,探讨蛇床子素（Ost）延缓NSC衰老的作用,并探讨其可能调控机制。方法体外培养NSC,在增殖培养基中传代纯化培养至第3代,用于细胞实验。利用叔丁基过氧化氢（t-BHP）50,100和150μmol·L^-1分别与NSC孵育1,2和3 h,CCK-8法检测细胞存活率,确定t-BHP 100μmol·L^-1与NSC孵育2 h为制备细胞衰老模型的最佳条件。再加入Ost 50,100和150μmol·L^-1作用1,2和3 h,CCK-8法检测细胞存活率,选择Ost促进细胞存活的最佳作用浓度和作用时间。实验分为细胞对照组、衰老模型组（NSC与t-BHP 100μmol·L^-1作用2 h）和模型＋Ost组（NSC与t-BHP 100μmol·L^-1作用2 h后,再与Ost 100μmol·L^-1作用2 h）,用Ki67染色法检测NSC细胞增殖能力,免疫组化法检测NSC分化能力,衰老β-半乳糖苷酶（Sa-β-gal）法检测衰老细胞百分率,RT-PCR法检测p53,p21,p19和p16基因表达,Western蛋白印迹法检测P16、细胞周期蛋白依赖性激酶D1（CDKD1）和磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白（p Rb）蛋白表达。结果 Ost 100μmol·L^-1作用2 h可明显促进NSC存活（P〈0.01）。与细胞对照组相比,模型组NSC增殖能力明显下降（P〈0.05）,分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力亦明显下降（P〈0.05）,Sa-β-gal阳性衰老细胞百分率升高（P〈0.01）。与模型组相比,模型＋Ost 100μmol·L^-1组NSC增殖能力升高（P〈0.05）,分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力亦明显提高（P〈0.05）,Sa-β-gal阳性衰老细胞百分率下降（P〈0.01）。RT-PCR结果显示,与模型组相比,模型＋Ost100μmol·L^-1组p16和p53 m RNA表达水平降低（P〈0.05）,p19和p21 m RNA表达无显著性变化;与模型组相比,模型＋Ost 100μmol·L^-1组P16蛋白表达降低,同时CDKD1和p Rb蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）。结论 Ost具有延缓t-BHP造成NSC衰老的作用,其延缓NSC衰老作用机制可能�