桑黄多糖P1对肝癌HepG2细胞周期和钙调蛋白信号通路的影响

摘要：目的探讨桑黄多糖P1抑制人源性肝癌Hep G2细胞增殖的作用机制。方法桑黄多糖P16.25~200 mg·L-1与Hep G2细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率。桑黄多糖P1 100和200 mg·L-1与Hep G2细胞作用48 h,流式细胞术检测细胞周期和凋亡;荧光分光光度法测定细胞内Ca2＋浓度;实时荧光定量PCR检测细胞内钙调蛋白（Ca M）、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca MKⅡ）、表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）、K-ras和c-fos基因表达;Western蛋白质印迹法检测细胞内Ca MKⅡ和Kras蛋白表达。结果桑黄多糖P1对Hep G2细胞存活的抑制率随药物浓度的增大而显著提高,100和200 mg·L-1时抑制率高达44.0%和61.3%。桑黄多糖P1 200 mg·L-1处理48 h S期细胞百分含量明显升高,由对照组的（23.3±3.4）%升高至（37.8±2.2）%（P〈0.01）,而G2/M期细胞百分含量明显降低,由对照组的（15.3±1.2）%降至（3.4±1.9）%（P〈0.01）;细胞凋亡率无明显变化。与对照组相比,桑黄多糖P1 100和200 mg·L-1处理48 h后Ca M,Ca MKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos mRNA水平显著下降（P〈0.01）;Western蛋白质印迹检测结果显示,桑黄多糖P1作用48 h后Hep G2细胞内Ca MKⅡ和K-ras蛋白水平与对照组相比显著下降（P〈0.01）。桑黄多糖P1 200 mg·L-1处理细胞后,细胞内Ca2＋荧光强度显著升高,0~20 min内分别由951增至1430（P〈0.01）,而对照组一直维持在1150左右。结论桑黄多糖P1可能通过提高细胞内Ca2＋浓度以及下调Ca M,Ca MKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos基因的表达,诱导Hep G2细胞S期阻滞,从而抑制Hep G2细胞增殖。