原矛头蝮蛇毒及其组分对凝血功能的影响

摘要：目的研究原矛头蝮蛇毒（PMV）及其组分作用于血液循环系统的部分生物学活性,进一步探讨其毒性机制。方法采用Sephadex G-75凝胶层析方法分离不同分子质量范围的蛋白组分FⅠ,FⅡ和FⅢ。贫血小板血浆调节富血小板血浆使血小板为3×1011L-1,血小板悬液分别与PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.03 g·L-1预孵育5 min,血小板聚集仪测定PMV及其组分诱导血小板聚集活性;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.05 g·L-1分别与纤溶酶原0.1 U·L-1预孵育10 min,采用单一时间点测定和酶动力学测定PMV及其组分酶切发色底物S-2251的作用;将大鼠血浆与PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ1.0 g·L-1分别孵育5和30 min,测定凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）水平;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ10,50和250 mg·L-1处理微血管内皮细胞24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.1 g·L-1与含卵磷脂和不含卵磷脂的豚鼠红细胞悬液分别孵育不同时间,计算溶血率。结果与对照组相比,PMV和高分子质量蛋白组分FⅠ（〉71 ku）诱导血小板聚集率显著升高〔（61.0±5.8）%和（56.9±5.9）%vs（12.4±4.1）%〕（P〈0.01）。酶切发色底物S-2251结果显示,PMV与中分子质量组分FⅡ（18~37 ku）具有酶切发色底物的作用（P〈0.01）。PMV和FⅠ可引起血浆凝固。与对照组相比,FⅡ组分和低分子质量蛋白组分FⅢ（〈10 ku）明显使TT,APTT和PT的时间延长（P〈0.01）。PMV,FⅠ及FⅡ导致内皮细胞解离悬浮,与对照组相比,细胞存活率下降,分别为（56.8±3.6）%,（71.6±3.8）%和（58.2±5.5）%。在无卵磷脂条件下,PMV和FⅡ可缓慢地引起红细胞轻度溶血;在卵磷脂参与下,PMV和FⅡ引起豚鼠红细胞急剧溶血,与正常对照组相比,在0.5 min内溶血率从（17.7±1.0）%分别升高至（81.0±4.0）%和（81.0±1.0）%（P〈0.01）。结论 PMV在体外表现出多方面的血�