基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用

摘要：目的：考察基于核酸的酶联桥接分析（ELBA）法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性，为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线（5-50000pmol·L-1）。LNCap细胞中转染双链siRNA（终浓度100nmol·L-1），24h后取上清、细胞裂解物及RNA诱导沉默复合体（RlSC），根据标准曲线对各组分中反义链RNA浓度进行定量。分别配制含双链siRNA5-25000pmol·L-1或反义siRNA5-25000pmol·L-1的小鼠全血浆样品，用小鼠肝、心、肾和脾生物基质配制反义siRNA3-6250pmol·L-1样品，考察ELBA方法对血浆和生物基质中siRNA反义链进行定量的特异性和定量范围。sc给予C57小鼠LNCap细胞制备移植瘤模型，iv给予双链siRNA药物15nmol·kg-1，30min后ELBA法测定血浆、肿瘤组织、肝、肾、心和脾中反义链siRNA浓度。结果基于ELBA方法对细胞基质中反义链siRNA定量范围为5-50000pmol·L-1，且ELBA可以对转染双链siRNA的细胞裂解物和RlSC复合物中的反义链siRNA进行特异定量。ELBA对血浆中双链siRNA中的反义链无响应，对血浆和组织中siRNA反义链的定量分析范围分别为5-25000pmol·L-1和3-3125pmol·L-1。双链siRNA在前列腺特异膜抗原-适配子递送系统下静脉给药30min后，ELBA检测发现，反义链RNA分布丰度依次为肿瘤组织、肝、肾、血和脾。结论ELBA方法可用于siRNA药物的反义链的定量分析及组织分布研究。