重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价

摘要：目的：检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白（ HSA-IFNα-2b）体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法构建含1.6倍 HBV 基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒（AdGFP-HBV），感染人肝细胞系 HepG2细胞，构建 HBV 复制细胞模型；ELISA 法检测 HBV 乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒 e 抗原（HBeAg）表达；mTT 法检测 HSA-IFNα-2b 对 HepG2细胞的毒性作用；定量 PCR 法检测细胞内 HBV RNA的相对表达以及细胞上清中 HBV DNA 绝对表达水平；双报告基因法检测 HSA-IFNα-2b 对 HBV 增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV 感染 HepG2细胞后可以复制表达 HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的 HepG2细胞，使 HBsAg 表达降低51.32%（P﹤0.01），HBeAg 降低50.26%（P﹤0.01），而相同浓度的 HSA-IFNα-2b 并不抑制细胞的增殖。随 HSA-IFNα-2b 浓度增加，其对 HBsAg 表达的抑制作用逐渐升高，HSA-IFNα-2b 对 HBsAg 表达的抑制率（Y）与其浓度（X）的回归方程是 Y ＝21.11 IgX＋11.91（r 2＝0.954），IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中 HBV RNA 下降52.83%（P﹤0.01），培养上清中 HBV DNA 降低53.07%（P﹤0.01）。HSA-IFNα-2b 500 kU ·L-1使 HBV 增强子Ⅰ活性下降40.04%（P﹤0.01）。结论构建了可用于药物评价的 HBV 复制细胞模型，HSA-IFNα-2b 体外具有抗 HBV 活性。