JNK通路参与曲古抑菌素A诱导的胰腺癌PANC-1细胞凋亡

摘要：目的研究JNK通路在曲古抑菌素A（TSA）诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡过程中的激活情况，并探讨其机制。方法PANC-1细胞经TSA1．0 μmol·L^-1与JNK抑制剂（SP600125）20μmol·L^-1单独或联合处理24h后，分别用CCK-8法和Hoechst33258染色法检测对PANC-1细胞的生长和细胞凋亡的作用；荧光定量PCR检测C—Jun，C-fos，E1kl，bax和bcl-2mRNA表达；Western蛋白质印迹法检测P-c-Jun、P-JNK、bax、活性胱天蛋白酶8、bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达。结果CCK-8结果显示，TSA单独处理，PANC-1细胞的存活率随着TSA浓度的增加而降低，并具有一定的量效关系（r=0．9564，P〈0．05）。TSA＋SP600125组细胞存活率较TSA单独处理明显增加（P〈0．05）。Hoechst33258染色显示，正常对照组、TSA组和TSA＋SP600125组凋亡率分别为（1．8±0．4）％，（6．2±1．4）％和（3．9±0．9）％，组间差异具有明显的统计学意义（P〈0．05，24h）。与TSA组比较，TSA4-SP600125组促凋亡基因bax以及JNK通路相关基因c-Jun和C—fosmRNA表达明显降低，ElklmRNA表达降低，差异显著（P〈0．05）；而抗凋亡基因bcl-2mRNA表达明显升高（P〈0．05）。TSA作用PANC-1细胞1h后激活JNK通路的相关蛋白c-Jun和JNK，并在2h达到最高峰。与TSA组比较，TSA＋SP600125组bax及活性胱天蛋白酶8蛋白的表达明显降低（P〈0．05），bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白的表达明显升高（P〈0．05）。结论激活JNK通路是TSA诱导PANC细胞凋亡的重要机制之一，可能是通过影响线粒体凋亡途径发挥作用。