大气细颗粒物PM_（2.5）诱导肺上皮MLE-12细胞的氧化应激和自噬

摘要：目的研究大气细颗粒物PM2.5对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞的氧化应激和自噬的影响。方法用采集和处理的2009年北京市细颗粒物PM2.525,50,100和200 mg.L-1暴露处理MLE-12细胞24和48 h,用MTT比色法测定细胞存活率,双乙酰基二氯荧光素（DCFH-DA）荧光探针检测细胞内活性氧类（ROS）自由基生成,Western蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3Ⅰ蛋白（LC3Ⅰ）和LC3Ⅱ表达,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体的形成。结果与细胞对照组比较,PM2.5100和200 mg.L-1处理24 h组细胞存活率明显降低,分别降低28%和33%（P〈0.01）;暴露处理48 h,PM2.525～200 mg.L-1组细胞存活率均明显下降（P〈0.01）,并呈浓度效应关系（R2=0.4940,P〈0.01）。PM2.5100和200 mg.L-1处理MLE-12细胞3 h,胞内ROS水平较细胞对照组显著升高,分别升高27.6%和60.7%（P〈0.01）。此外,PM2.5100 mg.L-1处理细胞12,24和48 h及PM2.550,100和200 mg.L-1处理细胞24 h细胞自噬标志物LC3Ⅱ蛋白表达均明显增强,呈现明显的时间效应（R2=0.9150,P〈0.01）和浓度效应（R2=0.6338,P〈0.01）关系。PM2.5100 mg.L-1处理24 h细胞内自噬体荧光强度明显升高（P〈0.05）,细胞核周边有明显的自噬泡环绕。结论 PM2.5诱导肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞的氧化应激,并引发细胞自噬。