二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制

摘要：目的探讨二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）基因表达作用及其分子机制。方法应用稳定表达G6Pase的鼠肝细胞瘤H4ⅡE M1.3细胞,一组细胞分别给予二甲双胍0.1～5.0mmol·L-1孵育16h;另一组细胞先加入化合物C 20μmol·L-1,Bay11-7085 5μmol·L-1或雷帕霉素25nmol·L-1作用30min后,再加入二甲双胍2mmol·L-1共育16h,采用荧光素酶报告基因检测方法测定G6Pase基因表达水平;细胞加入化合物C 20μmol·L-1作用30min后,再分别加入二甲双胍2mmol·L-1、5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸（AICAR）1mmol·L-1孵育15min,Western印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）蛋白表达及其磷酸化水平;细胞加入二甲双胍2mmol·L-1和胰岛素1μmol·L-1作用15min,Western印迹法检测蛋白激酶B（Akt）蛋白表达及其磷酸化水平。结果二甲双胍0.5,1,2和5 mmol·L-1作用16h可以显著抑制G6Pase基因表达（P〈0.05,P〈0.01）,二甲双胍0.5和5mmol·L-1时,分别抑制G6Pase基因表达26%（P〈0.05）和85%（P〈0.01）。AMPK抑制剂化合物C可部分逆转二甲双胍的抑制作用（P〈0.05）;二甲双胍可诱导AMPK磷酸化,与AICAR作用相似,但这一作用可被化合物C抑制。结论二甲双胍抑制G6Pase基因表达,其作用机制可能与激活AMPK有关,而可能与Akt,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及核因子-κB（NF-κB）介导的通路无关。