穿琥宁抗炎作用的血红素加氧酶-1的信号转导机制

摘要：目的初步探讨穿琥宁抗炎作用的信号转导机制。方法用WST-8细胞计数试剂盒检测穿琥宁的细胞毒性;用IN Cell Analyzer 2000活细胞成像系统及组成型增强表达绿色荧光蛋白偶联NF-κBP65（EGFP-NF-κBP65）融合蛋白的CHO细胞和EGFP偶联促分裂原活化蛋白激酶APk2（EGFP-MAPK-APk2）融合蛋白的BHK细胞观察穿琥宁对白细胞介素1β（IL-1β）或肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导NF-κBP65核转位及脂多糖（LPS）诱导的P38MAPK下游分子MAPK-APk2核转位的影响;Western印迹法检测穿琥宁和血红素加氧酶-1（HO-1）特异性抑制剂锌原卟啉（ZnPP）对RAW264.7细胞HO-1、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧化酶2（COX-2）表达的影响;Griess反应和ELISA法测定穿琥宁对RAW264.7细胞一氧化氮（NO）和前列腺素E2（PGE2）生成的影响。结果穿琥宁3～100μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞无细胞毒性。穿琥宁不能抑制由IL-1β诱导的NF-κBP65核转位和LPS诱导的MAPK-APk2核转位,对TNF-α诱导的NF-κBP65核转位有较弱的抑制作用,抑制率为20%,无明显浓度效应关系。穿琥宁3,10,30和100μmol·L-1作用4 h能诱导RAW264.7细胞HO-1表达,穿琥宁100μmol· L-1作用6 h显著抑制IL-1β诱导的COX-2表达和PGE2产生,作用12 h抑制iNOS表达和NO产生。HO-1活性抑制剂ZnPP能部分逆转穿琥宁的上述作用。结论穿琥宁的抗炎作用可能主要通过HO-1信号转导,继而抑制iNOS和COX-2的表达及NO和PGE2的产生。对NF-κB信号传导系统的调节作用尚不清楚。