白鲜碱对HepG2细胞的毒性作用及其机制

摘要：目的研究白鲜碱的肝细胞毒性作用及其毒性机制。方法白鲜碱2.5～800μmol·L-1与HepG2细胞作用24 h,用MTT法检测细胞存活率并计算IC50值,用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞膜损伤。白鲜碱25～100μmol·L-1与HepG2细胞作用4,24或48 h,用试剂盒方法分别检测细胞培养液中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）和谷氨酰转肽酶（GGT）活性。用倒置显微镜观察细胞形态变化;激光共聚焦扫描显微镜检测细胞线粒体膜电位的变化。结果白鲜碱25～800μmol· L-1与HepG2细胞作用24 h对HepG2细胞存活的抑制作用随着浓度的增加而降低（r=0.965,P〈0.05）,IC50值为（283±27）μmol·L-1。与溶剂对照组相比,白鲜碱12.5～50μmol·L-1作用24 h,HepG2细胞LDH释放率显著升高（P〈0.01）。白鲜碱100和200μmol·L-1可引起HepG2细胞形态发生明显变化,细胞皱缩脱落,细胞数目减少,并使HepG2细胞线粒体膜电位下降（P〈0.05,P〈0.01）。白鲜碱100和200μmol·L-1与HepG2细胞作用24 h可使细胞培养液中ALT和AST活性显著升高,并呈浓度依赖性（r=0.995,P〈0.05和r=0.996,P〈0.05）,线粒体膜电位亦明显下降（r=0.978,P〈0.05）。与溶剂对照组相比,白鲜碱100和200μmol·L-1与HepG2细胞作用4 h,细胞培养液中GST活性明显升高（P〈0.05）;作用24 h,GST活性升高呈浓度依赖性（r=0.987,P〈0.05）。白鲜碱200μmol· L-1作用48 h导致HepG2细胞培养液中GGT活性升高（P〈0.05）。结论较高浓度的白鲜碱（≥100μmol· L-1）具有潜在的肝毒性,细胞膜损伤和线粒体损伤可能是其肝毒性作用机制之一。