基于胚胎干细胞实验模型评价黄芩苷的胚胎毒性

摘要：目的应用胚胎干细胞实验模型体系评价黄芩苷的胚胎毒性。方法分别将胚胎干细胞D3和胚胎成纤维细胞（BALB／c3T3）与黄芩苷20，40，60，80和100mg·L-1共培养，MTT法检测细胞活性，分别计算黄芩苷对胚胎干细胞D3和3T3细胞增殖半数抑制浓度IC50（D3）和IC如（3T3）。利用悬滴-悬浮-贴壁方法，体外培养胚胎干细胞向心肌细胞分化，实时定量PCR方法检测心肌细胞特异表达肌球蛋白重链（β-MHC）基因的表达，计算胚胎干细胞D3定向分化半数抑制浓度，即ID50（D3）。利用胚胎毒性统计公式，预测黄芩苷的胚胎毒性。结果不同浓度黄芩苷作用10d后，胚胎干细胞D3和3T3细胞存活能力随着黄芩苷浓度增加缓慢下降，黄芩苷对胚胎干细胞D3和3T3细胞增殖均有一定程度的抑制作用，其IC50（D3）和IC50（3T3）分别为135．9和63．3mg·L-1。体外胚胎干细胞经悬滴-悬浮-贴壁培养可分化为能够表达β-MHC基因的心肌样细胞，黄芩苷2，5，10，20和40mg·L-1对胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的抑制率分别为29．5％，46．8％，59．6％，61．7％和69．0％，黄芩苷对胚胎干细胞分化有一定程度的抑制作用，其体外心肌细胞定向分化的ID50（D3）为7．25mg·L-1。根据胚胎毒性计算公式，计算得黄芩苷具有弱胚胎毒性。结论黄芩苷具有弱胚胎毒性。