腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制

摘要：目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）,胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB（NF-κB）的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为（57.7±15.0）%,（56.5±11.1）%,（43.8±5.7）%和（28.8±4.1）%,呈时间依赖性下降（r=0.9192,P〈0.01）;腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为（83.1±11.2）%,（67.9±6.7）%,（55.3±5.0）%和（45.4±5.4）%,呈浓度依赖性降低（r=0.8252,P〈0.01）。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为（15.5±1.1）%,（28.2±0.8）%,（40.1±2.2）%和（50.6±1.3）%,与对照组（2.1±0.3）%相比均明显增加（P〈0.05）。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强（P〈0.05,P〈0.01）,胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加（rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P〈0.05）。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。