咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

摘要：目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶（5-LOX）激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白（GFP）-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复（OGD/R）及过氧化氢（H2O2）160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧（ROS）的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为（63.1±6.6）%和（70.7±6.9）%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为（62.5±7.7）%和（75.7±9.5）%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从（63.1±6.6）%分别增加到（87.3±2.0）%和（89.9±6.3）%,细胞坏死率从（31.4±1.5）%降低到（10.1±2.0）%和（11.7±1.3）%（P〈0.01）;使H2O2处理细胞存活率从（62.51±7.65）%增加到（92.59±4.02）%和（75.31±6.60）%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和（90.6±19.5）ng.g-1蛋白（P〈0.01）。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。