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1 《中国药理学与毒理学杂志》为军事医学科学院毒物药物研究所、中国药 理学会和中国毒理学会共同主办的学术性刊物,双月刊,国内外公开发行。编辑部设在军事医学科学院毒物药物研究所。本刊是中国中文核心期刊
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一氧化氮供体PABA/NO经线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡
作者: 刘玲 黄紫乐 王建刚
关键词: 一氧化氮 一氧化氮供体 偶氮鎓二醇盐 细胞凋亡
摘要:目的 研究新型一氧化氮(NO)供体,O2-{2,4-二硝基-5-〔4-(N-甲基氨基)苯甲酰氧基〕苯基}-1-(N,N-二甲基氨基)偶氮-1-鎓-1,2-二醇(PABA/NO)对人肝癌细胞凋亡的影响.方法 PABA/NO 7.5,15.0和30.0μmol·L-1处理细胞24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,倒置显微镜下检测细胞形态,DAF-FM DA荧光染色法检测细胞内NO水平,膜联蛋白(Annexin)Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rh123)染色法检测细胞线粒体膜电位,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、活化胱天蛋白酶3、细胞色素c(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达.结果 与细胞对照组比较,PABA/NO可显著抑制HepG2细胞存活,24 h时IC50值为(10.8±0.6)μmol·L-1;形态上出现胞膜皱缩、细胞扁圆等变化;细胞内NO水平提高,荧光强度分别为121±9(P<0.05),174±31(P<0.05)和230±43(P<0.01);凋亡率由原来的(2.9±0.5)%增加至(17.0±4.5)%,(39.8±5.4)%和(74.3±45.2)%(P<0.01);细胞内Rh123的荧光强度由原来的668±69下降到605±73,420±65(P<0.05)和242±47(P<0.01);PABA/NO引起Bcl-2表达下调(P<0.01)、Bax及活化胱天蛋白酶3表达上调,胞浆中Cyt c的表达由原来的0.15±0.04升高到0.27±0.06(P<0.05),0.38±0.07(P<0.01)和0.82±0.16(P<0.01).胞核中AIF的表达由原来0.183±0.032升高至0.231±0.011,0.682±0.020(P<0.01)和0.966±0.090(P<0.01).加入NO清除剂羧基(carboxy)-PTIO后,可逆转PABA/NO引起的Bcl-2表达下调,对Bax、活化胱天蛋白酶3、胞浆中Cyt c和胞核中AIF蛋白表达的上调也有一定的逆转作用(P<0.01).结论 PABA/NO可能经线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡.
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