吡唑啉酮衍生物镉（Ⅱ）配合物体内外对黑素瘤B16细胞的抗肿瘤作用

摘要：目的研究吡唑啉酮镉（Ⅱ）配合物1-苯基-3-甲基-4-丙酰基-5-吡唑啉酮缩水杨酰肼-镉（Ⅱ）（Cd-PMPP-SAL）体内外对小鼠黑素瘤B16细胞的抗肿瘤作用及其作用机制。方法以Cd-PMPP-SAL1.0,1.5,3.0,5.0和10.0 mg·L^-1分别作用小鼠黑素瘤B16细胞24,48和72 h,采用MTT法检测B16细胞存活率;Cd-PMPP-SAL 6.25,12.50和25.00 mg·L^-1作用B16细胞24 h,用Hoechst33258染色观察B16细胞形态,AnnenxinⅤ/PI双染色法检测B16细胞凋亡率;胱天蛋白酶活性检测试剂盒检测B16细胞内胱天蛋白酶活性。C57BL/6J小鼠皮下接种B16细胞制备荷瘤模型,5 d后分别瘤内注射Cd-PMPP-SAL 6.25,12.50和25.00 mg·kg^-1,每天1次,连续12 d。每天检测体质量,给药结束后处死小鼠,测量瘤体积并测瘤质量,计算抑瘤率。HE染色法观察瘤体、肝和肺组织病理变化;免疫组织化学法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）和成纤维细胞生长因子2（FGF2）蛋白表达;TUNEL法检测移植瘤组织内的细胞凋亡。结果Cd-PMPP-SAL抑制B16细胞存活,IC_（50）为4.946 mg·L^-1,95%置信限为4.24～5.65 mg·L^-1;Cd-PMPP-SAL12.50和25.00 mg·L^-1作用24 h,B16细胞凋亡率为（12.8±1.4）%和（18.4±0.4）%,显著高于细胞对照组（1.7±0.1）（P〈0.01）;Cd-PMPP-SAL 25.00 mg·L^-1组胱天蛋白酶3和9活性与细胞对照组比较显著增高（P〈0.01）,胱天蛋白酶3/7活性变化不明显。瘤内注射Cd-PMPP-SAL 12.50和25.00 mg·kg^-1治疗组,从治疗第8天起瘤体积与模型组相比明显减小（P〈0.01）,对小鼠体质量无明显影响;Cd-PMPP-SAL 12.50和25.00 mg·kg^-1治疗组小鼠移植瘤组织有不同程度的坏死,肝、肺组织无明显病理变化;与模型组比较,Cd-PMPP-SAL 12.50和25.00 mg·kg^-1治疗组移植瘤组织VEGF和FGF2蛋白表达显著下降（P〈0.05）,凋亡细胞明显增加（P〈0.05）。结论 Cd-PMPP-SAL体内外可有效地抑制B16细胞生长,该作用可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤内血管生�